巨噬细胞培养

yuanfengtcm

我要做肺泡巨噬细胞培养方面的实验,
* ^' o0 m/ ^2 N5 Z. r可是在分离巨噬细胞时遇到了困难,
细胞在两天后全都死光光了.好心痛啊......
想请做过这方面实验的兄弟帮忙指点一二!

6 y, W8 t! B( A
/ V' F, r. H! j0 p5 b8 p不胜感激!

aizy_cn

请看http://www.aizy.cn/bbs/viewthread.php?tid=1993&extra=page%3D1

yuanfengtcm

当时处死动物时，是个女生，估计是给整个动物弄到酒精里了，会不会呛到肺里？
因为我们的巨噬细胞是从肺泡灌洗液里提取的，如果酒精呛到肺里，会不会影响？
9 m0 w4 n9 D5 D  N1 t9 g2 f8 E还有，肺泡灌洗液体用的是生理盐水，离心的时候是1000g，5min，这些会不会有影响啊？
; m  S, N8 }" t我也查了不少资料，说什么的都有，就是不知道改相信谁的了。
% F7 P' u% a5 n: L, ~想问问各位有做过巨噬细胞培养的大侠，交流一下，共同进步。
: j5 l& G+ }- r& @9 ~$ g1 q+ _, F4 @

aizy_cn

楼主讲的有可能，不过我没有做过这个真的还不敢给你瞎指挥，如果文献中各种做法都有的话，估计要自己摸索个条件了。

yuanfengtcm

有个病理学的教授（博士）告诉我们：巨噬细胞要三天时间才能贴壁。
1 y% [6 p  a4 N( M# K& w8 C我又怀疑是不是还没有贴壁就被冲洗掉了？但是当时明明看到有可多细胞的……
$ y4 G* U$ w( U) G% v8 L' s今天就培养够三天了，下午去看看，希望都能贴壁。

aizy_cn

祝愿你成功

yuanfengtcm

以前做了几次,都不成功.
" M/ [2 v  w7 d0 F; U* o4 c现在细胞成长的比较好了，但是又有了新的问题了:
' J3 v  _% _: E. S& e! r不能把细胞从培养瓶上消化下来了.
3 K# M, A9 U  H" F3 Q" A9 o不知道怎么回事,请各位指点.

xiaobo421

为什么不用现成的细胞系,如THP-1.