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[技术方法] 大鼠阴道涂片及受孕的相关知识

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发表于 2011-7-6 13:41:31 | 显示全部楼层 |阅读模式
% M4 n& Y) o& u$ V
1.关于SD大鼠的选择, S8 R  a# J6 g0 |9 N9 _5 N0 I
性成熟期约为8周,体重240-280g左右(雌250g,雄300g)
5 P- p" g+ N! B0 Q9 p  g/ M. F最适交配时间:雄鼠,90日龄,约400g
6 V3 p1 g0 F' {7 n  j雌鼠,80日龄,约300g
' s( h. P* |0 n& X/ K- t: J理论上性成熟后交配没有问题,但是考虑到成功率的高低,建议在最适时间交配。 尤其有资料指出雌鼠的体重过轻容易影响胎鼠的质量。% `. l& T6 o! ~3 A& o: a# ^& _
我们实验室雌鼠体重偏轻,约200-250g,但是受孕过程也很顺利,胎鼠也没有明显异常。4 C$ I; o% b, Q
  S  V) T$ r7 P
2.关于受孕前后的饲养/ e7 G: i2 b* {) l
饲料:除常规大鼠饲料外,可添加瓜子和鸡蛋。瓜子是生的葵瓜子,不用去壳,它们很会剥;鸡蛋是白煮,老鼠尤其爱吃蛋黄。饮水中可添加维生素E。
" e; `( B& e# `3 D; A合笼:傍晚合笼,次晨分笼,检查是否交配。7 o" d; u; B! G/ [
9 c* c2 d4 d  c. r
3.关于检查受孕与否的方式
# Y) z2 S% s: ]: o2 L  g6 b1)有资料说雌鼠的阴道口随动情周期有所变化,但我想一般人难以分辨;5 h2 t' T2 g3 U% u' M: S1 m. G
2)检查阴栓有很多人提到过,不过如果检查的时间迟了点,阴栓极有可能已脱落,反正我是一次没见到过;如果是有底铺垫料的鼠笼,估计也没人能找到脱落的阴栓。3 S  k- ^! E" a. J9 w* A
3)阴道涂片,我想是最实用,成功率最高的了。下面会详细介绍...+ t. v+ E7 e5 e3 M6 S

& t0 V) D  e1 d3 O4 o( ]' b; X涂片可以不用染色,基本能分辨。
3 o- F- h7 x2 Z7 P1.动情间期/静止期
/ s$ _3 x! o" G* W. h- _5 l6 U3 o% z  l$ p  q$ ^
大部分为白细胞,混有少量较小的有核扁平上皮细胞7 `2 K5 I  x5 x- F" K+ y  j' N, d
! R& p/ l  Y3 V9 x& }9 {6 |9 Q

: a: i6 n0 d2 Z( h' b9 [  w2.动情间期向动情前期发展
' W* _1 p( D- u* k  y3 v" O2 B5 z2 O& p
膨大的椭圆形的有核上皮细胞逐渐出现,增多 0 y2 H  b5 w0 [
- D4 O+ t- p5 f/ C- Q2 g

  I. A# C2 m/ j8 G+ Q; z3 ?3.动情前期
; L$ S. y1 i. a; ?6 W. T3 c
9 n$ c2 ?2 u+ u+ m* b大部分为膨大的椭圆形有核上皮细胞 ; Z! h/ `/ [4 p' M
, ~0 G% E1 @/ ?  D4 {7 f
3 T( P% @$ ]& G4 Y; v3 l8 x! _
4.动情期1 v/ `- E: F3 E4 G5 h

, x2 x2 V) K; s7 a膨大的上皮细胞核消失,成为鳞状脱落的角化上皮细胞,并聚堆,似落叶
5 y4 m* @4 H) M( G1 O( F1 U6 X" ?! E; ^2 b. ^; d  T2 P9 @" a
2 L3 R8 ]) Q( W) i
& s' p. k; J6 \, @
$ f) j8 }0 b# P; K  g9 ^9 m/ Z  J
6.动情后期6 m0 [. A- N' Q8 W

$ Q* V# A( S) U/ Z6 F# a大部分白细胞,混有少量角化上皮细胞;5 q0 q6 O. p& U
成功交配过的会看到大量精子细胞(头天下午5点合笼,次日中午12点才查的涂片,依旧能发现不少精子细胞),所以用此方法确定是否交配比较准确。
1 A& i; Z: \! B% r6 C
" K% Y7 o# E% E; _: G& n3 Y1 r
* Q- D& M( F. [看阴道涂片的经验总结:" ?& R+ X: t+ h! m
由于个人涂片的时间和技术不一样,老鼠的周期也不是每只都相同,而且周期之间是逐渐变化,没有明显界限,所以不容易看到典型周期的典型涂片。最好是每天做一到两次,观察变化的规律。3 H& x2 _, R/ F# B# \' e5 O
当白细胞的比例逐渐降低,有核上皮细胞,角化的鳞状上皮细胞越来越来多,持续2天(动情前期,动情期)接近满视野的时候,合笼多会发生交配。一旦角化的细胞变少,白细胞比例增多,说明已经开始进入动情后期,动情间期,如果没有合笼,或合笼后涂片中未发现精子,你多半只有再等待下一轮周期了。
) S5 u4 Y/ l$ T有同学说如果动情间期持续3天以上,可能是已怀孕但是漏检了。我想还是蛮有道理的,不过漏掉精子并不容易。我有一次头天下午5点将其合笼,次日中午12点才查的涂片;而且那次不知什么原因笼底积水,第二天中午做涂片前我发现两大鼠还一直扒着笼沿站着,这样依旧能发现不少精子细胞,所以我想只要仔细观察,应该不会漏检掉精子.' l! I! o+ n9 m+ ]) d* N# ~

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